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4.补体依赖性细胞毒试验及精子制动试验 精子抗体与精子抗原结合,激活补体系统,导致细胞膜通透性及完整性的损害,若为制动抗体,使精子失去活力,制动值>=2为阳性;若为细胞毒抗体,则用某些染料染色阳性,要求精子活率>70%。微量法仅需样本几微升,对精子活动率较低的样本,可用上游法提取活精子,活率可达90%以上。本法仅能检测作用于精子尾干的抗体。特异性强,敏感性差,假阴性率较高。
5.被动血凝法 用精子提取物及精浆包被经处理的红细胞使之致敏,将致每红细胞与待测稀释血清在微量反应板上进行反应,出现红细胞凝集为阳性。此法不受精子活率、计数、精液中微生物或组织碎片的影响,研究者认为此法特异、敏感,但报道较少,其可靠性及实用性尚待证实。
6.酶联免疫吸附试验(ELISA)及生物素-亲合素酶联免疫吸附法(BA-ELISA)应用完整精子或精子膜抗原包被固相载体,待测样本中精子抗体与之培养后可结合于抗原表面。随之酶标第二抗体亦可结合其表面,后经加酶底物,根据底物显色情况判断结果。可用肉眼观察,亦可用酶标仪测定,后者客观准确,一般以大于一组阴性血清光密度均值加2倍标准为阳性。由于完整精子包被易致非特异性吸附,因此若以可溶性精子膜抗原包被,则本法敏感、特异、客观、定量,能确定抗体类型,且易操作。BA-ELISA是在常规ELISA基础上发展起来的新一代定量检测法,其敏感法性、特异性超过常规法。
7.免疫珠试验(Immunbead Test,IBT) 用抗人免疫球蛋白抗体包被的聚丙烯酰胺微能结合于结合了精子抗体的精子表面,在相差显微镜或电子显微镜下可见到免疫珠随精子运行,若结合一个或多个免疫珠的精子比例>=10%为阳性。此法可确定抗体的部位、类型及结合精子的比例,能测出活精子表面结合的抗体。其敏感性、特异性及重复性较好,操作稍繁琐,检测所需样本少,可用于宫颈粘液、输卵管液等微量样本的检测。
8.放射性标记免疫球蛋白或A蛋白法 同位素标记的抗人免疫球蛋白或葡萄球菌A蛋白与结合在精子表面的精子抗体结合,用X计数器测定精子表面的放射活性。若以活精子作为抗原其特异性及敏感性较高,且可确定抗体类型。但由于每次实验活动精子来源不同,其结果重复性较差;且设备昂贵,操作者易受放射性损害,故此法报道较少。
9.间接免疫荧光试验 精子表面结合于抗原后,能与标有荧光素的第二抗体结合,在荧光显微镜下观察呈现荧光的阳性精子比例。因试验中需要甲醇固定致精子膜损伤,内部抗原外露,而抗内部抗原的抗体在正常人中普遍存在,故假阳性太,无临床实用价值。近年来,作液相培养,实验过程中无需固定,又重新确定了本法的使用价值。 共3页 上一页 [1] [2] [3] 下一页 |